(本試劑僅用于科研、實驗、技術支持，不直接應用于臨床診斷) 【簡介】 用于全自動生化分析儀測定小而密低密度脂蛋白膽固醇含量。 低密度脂蛋白( LDL) 是由一系列密度、體積、理化特性不同的顆粒組成，存在明顯的異質性。小而密LDL( small dense LDL，sdLDL) 為LDL 亞組分之一，在動脈粥樣硬化( As) 發生、發展過程中起重要作用，是冠心病的危險因子。2002 年美國國家膽固醇教育計劃成人治療方案Ⅲ將sd LDL 作為冠心病新的危險因子。 【測定方法】 直接清除法 【測定原理】 第一步,試劑Ⅰ中的多聚體和非離子表面活性劑與sd LDL結合,選擇性地抑制sd LDL與膽固醇酶試劑反應,而膽固醇氧化酶(CO)和膽固醇酯酶(CE)與非sd LDL脂蛋白中的膽固醇反應,由于缺乏一個色源,Trinder反應不顯色。第二步,sd LDL-C與膽固醇酶試劑反應而顯色。 【試劑盒組成】 | 規 格 | 組 份 | 濃 度 | 試劑 | 液體雙試劑 試劑Ⅰ：試劑Ⅱ=3：1 | 4-氨基安替比林、TOOS、工具酶、表面活性劑等 | 適量 | sd LDL-C校準品 | 凍干1ml | sd LDL-C等 | 見標簽 |
【樣本要求】 標本應空腹抽取，盡快分離血清，在冷藏（2-8℃）條件可穩定3天。標本如不能及時測定，應于-20℃保存，避免反復凍融。 【測定步驟】 1.本試劑為液體雙試劑，可直接使用。 2.測定參數：波長：546nm；光徑：10mm；溫度：37℃。 3.測定方法： 加入物 | 空白管 | 標準管 | 測定管 | 試劑Ⅰ | 300 | 300 | 300 | 蒸餾水(uL) | 3 | - | - | 標準液(uL) | - | 3 | - | 樣本(uL) | - | - | 3 | 混勻，置37℃孵育5分鐘，讀取各管吸光度A1 | 試劑Ⅱ(uL) | 100 | 100 | 100 | 混勻，置37℃保溫5分鐘，讀取各管吸光度A2，計算ΔA=A2-A1 |
4.上機參, 數： 溫 度 | 37℃ | 血清+R1反應時間 | 300秒 | 樣本量 | 3uL | 主 波 長 | 546nm | 試劑Ⅰ | 300uL | 副 波 長 | 660nm | 試劑Ⅱ | 100uL | 血清+R1+R2反應時間 | 300秒 |
5.計算： sd LDL-C含量 （mmol/L） = [（ΔA標本-ΔA空白）/ （ΔA標準-ΔA空白）] × 校準品值 【性能指標】 1、 空白吸光度 ≤0.05； 2、 線性范圍0-2.60mmol/L； 3、 批內/分析內精密度 CV≤5％；批間相對極差 ≤7％； 4、 準確性 相對偏差不超過±10％。 5、 抗干擾性 血清膽紅素<250μmol/L、TG<18.2mmol/L、血紅蛋白<5.0g/L、抗壞血酸<55mg/dL時，對測定無顯著影響。 6、 方法對照 用本測定試劑和某進口sd LDL-C測定試劑測定100例血清sd LDL-C含量，結果顯示相關系數>0.970。 【注意事項】 1、試劑變混濁或空白吸光度值＞0.05時，將不能使用，應棄去； 2、建議各實驗室建立自己的正常值范圍； 3、試劑與樣本量可根據需要按比例調節； 4、請勿用嘴直接吸取試劑，避免接觸皮膚、眼睛及粘膜，一旦接觸，應即用水沖洗污染部位； 5、使用配套的校準品校準，校準周期為30天，更換試劑批號時需要重新校準。建議使用正常值和病理值生化質控血清進行室內質控，測定的控制值應在確定的限制范圍內，若控制值失控，實驗室應采取適當的糾正措施。 6、不能將R1與R2混成單試劑工作液。 【參考范圍】 參考值范圍：0.25-1.17mmol/L 建議各實驗室建立自己的正常參考值范圍。 【儲存條件與有效期】 未開封的試劑在2-8℃避光條件下可穩定14個月，置37℃水浴至少可穩定7天。 試劑開封后，存放在分析儀試劑倉中(2-8℃)的試劑在30天內性質穩定。 【參考文獻】 1. Okada, M., H. Mitsui, Y. Ito, A. Fujiwara, and K. Inano. 1998. Lowdensity lipoprotein cholesterol can be chemically measured: a new superior method. J. Lab. Clin. Med. 132: 195–201. 2. Sakaue, T., T. Hirano, G. Yoshino, K. Sakai, H. Takeuchi, and M. Adachi. 2000. Reaction of direct LDL-cholesterol assays with pure LDL fraction and IDL: comparison of three homogenous methods. Clin. Chim. Acta. 295: 97–106. 3. Nichols, A. V., R. M. Krauss, and T. A. Musliner. 1986. Nondenaturing polyacrylamide gradient gel electrophoresis. Methods Enzymol. 128: 417–433. 4. McNamara, J. R., D. M. Small, Z. Li, and E. J. Schaefer. 1996. Differences in LDL subspecies involve alterations in lipid composition and conformational changes in apolipoprotein B. J. Lipid Res. 37: 1924–1935.
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