(本試劑僅用于科研、實驗、技術支持,不直接應用于臨床診斷) 【簡介】 用于全自動法測定唾液酸含量。 唾液酸是細胞膜糖蛋白的重要組成部分,與生物體的許多生物學功能有關,且與細胞惡變、癌轉移、浸潤、失去接觸性抑制、細胞粘附性降低以及腫瘤抗原性密切相關。測定血清唾液酸濃度,可作為癌腫診斷輔助性指標和療效觀察指標。 【測定方法】 神經氨酸苷酶-NANA醛縮酶偶聯連續監測法 【測定原理】 第一步,樣本中的結合型唾液酸經神經氨酸苷酶作用后轉變為N-乙酰神經氨酸;第二步,N-乙酰神經氨酸在NANA醛縮酶作用下生存丙酮酸,生成的丙酮酸在乳酸脫氫酶的作用下使NADH脫氫氧化,監測340nm處吸光度的變化速率,與標準比較后可對樣本中的唾液酸進行定量。 【試劑盒組成】 | 規 格 | 組 份 | 濃 度 | 試劑 | 液體雙試劑 試劑I: 試劑II=3:1 | Tris-HCl緩沖液、神經氨酸苷酶、NANA醛縮酶、乳酸脫氫酶、NADH | 適量 | SA校準品 | 液體1ml | 唾液酸、穩定劑 | 見標簽 | SA質控品 | 凍干1ml | 唾液酸、穩定劑 | 見標簽 |
【樣本要求】 新鮮血清標本。樣本采集后,應盡快分離血清。樣本置于2~8℃可穩定7天,冰凍避光保存穩定6個月。 【測定步驟】 1.本試劑為液體雙試劑,可直接使用。 2.測定參數:波長:340nm;光徑:10mm;溫度:37℃。 3.測定方法: 加入物 | 測定管(U) | 標準管(S) | 空白管(B) | R1 (μl) | 180 | 180 | 180 | 標本 (μl) | 6 | - | - | 標準液(μl) | - | 6 | - | 蒸餾水(μl) | - | - | 6 | 混勻,置37℃孵育3~5分鐘,讀取各管吸光度A1 | R2(μl) | 60 | 60 | 60 | 混勻,置37℃延滯90秒后監測90秒內各管吸光度變化,計算每分鐘吸光度變化率ΔA/min |
4.上機參數: 溫 度 | 37℃ | 血清+R1反應時間 | 180~300秒 | 樣本量 | 6uL | 主 波 長 | 340nm | 試劑Ⅰ | 180uL | 副 波 長 | 405nm | 試劑Ⅱ | 60uL | 血清+R1+R2反應時間 | 180秒 |
5.計算: SA(mg/dL)= (ΔAU/min –ΔAB/min)/(ΔAS/min –ΔAB/min)×校準管濃度 【性能指標】 1、 空白吸光度A≥1.000, 空白吸光度變化速率≤0.030; 2、 線性范圍 0-200 mg/dL; 3、 批內/分析內精密度 CV≤5%;批間相對極差 ≤7%; 4、 準確性 相對偏差不超過±10%。 5、 抗干擾性 血清TG<8.0mmol/L、抗壞血酸<120mg/dL、膽紅素<60mg/dL、血紅蛋白<60mg/dL對測定結果沒有影響。 6、 方法對照 用本測定試劑和某進口試劑同時測定100例血清樣本中SA含量,結果顯示相關系數r = 0.998。 【注意事項】 1、試劑變混濁或空白吸光度值<1.000時,將不能使用,應棄去; 2、建議各實驗室建立自己的正常值范圍; 3、試劑與樣本量可根據需要按比例調節; 4、請勿用嘴直接吸取試劑,避免接觸皮膚、眼睛及粘膜,一旦接觸,應即用水沖洗污染部位; 5、使用配套的校準品校準,校準周期為30天,更換試劑批號時需要重新校準。建議使用正常值和病理值生化質控血清進行室內質控,測定的控制值應在確定的限制范圍內,若控制值失控,實驗室應采取適當的糾正措施。 【參考范圍】 血清 46.9-76.3 mg/dL 建議各實驗室建立自己的正常參考值范圍。 【儲存條件與有效期】 未開封的試劑在2-8℃避光條件下可穩定14個月,置37℃水浴至少可穩定7天。 試劑開封后,存放在分析儀試劑倉中(2-8℃)的試劑在30天內性質穩定。 【參考文獻】 1. Crook M. The determination of plasma or serum sialic acid. Clin Biochem. 1993; 26(1):31-38. 2. Igor A. Sobenin, et al. Optimization of the assay for sialic acid determination in low density lipoprotein. Journal of Lipid Research. 1998 (39): 2293-2295.
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