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        【特別推薦】:N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)測定試劑使用說明、性能指標  
        發布者:idrfz.chen   
         

        (本試劑僅用于科研、實驗、技術支持,不直接用于臨床診斷)

        【簡介】

        用于全自動生化分析儀測定尿液等標本中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活性。

        NAGEC.3.2.1.30)是存在于細胞溶酶體內的一種水解酶,尿中NAG主要來自腎近曲小管上皮細胞,但健康人尿中含量甚微。尿NAG活性水平的增高,是早期腎損傷和糖尿病微血管病變的敏感指標。NAG活性可用于腎小管間質性腎炎、尿路感染、糖尿病腎病綜合癥、高血壓腎病、腎移植后的排異反應和腎病綜合癥的早期診斷。上述疾病時NAG活性的升高均早于其他相應指標,有利于疾病的早期發現和及時治療。NAG活性還可用于重金屬等腎毒性物質環境污染的人群篩查、職業病調查等。

        【測定方法】

        MPT-NAG紫外連續監測法

        【測定原理】

        NAG催化6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)水解,生成產物6-甲基-2巰基吡啶(MPT),MPT340nm處有強烈吸收,通過測定340nm處每分鐘的吸光度增加速度計算NAG的活力。

        【單位定義】

        在本法條件下每分鐘催化1μmol底物水解的酶量為1個活性單位(U)。

        【試劑盒組成】

         

            

            

            

        試劑

        液體雙試劑

        試劑III=3 : 1

        檸檬酸緩沖液、MPT-NAG

        適量

        NAG校準品

        凍干1ml

        N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶、穩定劑

        見標簽

        NAG質控品

        凍干1ml

        N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶、穩定劑

        見標簽

        【樣本要求】

        取新鮮尿液,2-8℃可保存兩天,冰凍可保存一周,用前須在復溶后充分混勻,渾濁尿液應離心后取上清液測定。

        【測定步驟】

        1.本試劑為液體雙試劑,可直接使用。

        2.測定參數:主/副波長:340/450nm;光徑:10mm;溫度:37。

        3.測定方法:

        加入物

        空白管

        校準管

        測定管

        試劑Ⅰ

        225

        225

        225

        蒸餾水(uL)

        15

        -

        -

        標準液(uL)

        -

        15

        -

        樣本(u, , , , , L)

        -

        -

        15

        混勻,置37℃孵育5分鐘

        試劑Ⅱ(uL)

        75

        75

        75

        混勻,置37℃延滯1分鐘后讀取各管吸光度,每隔1分鐘讀1次,共讀3分鐘,計算平均每分鐘吸光度變化率ΔA/min

        4.上機參數:

          

        37

        延遲時間

        60

        樣本量

        15uL

          

        340nm

        試劑Ⅰ

        225uL

          

        450nm

        試劑Ⅱ

        75uL

        讀數時間

        180

        5.計算:

        NAGU/L)= [ (ΔAU/min –ΔAB/min)/(ΔAS/min –ΔAB/min)]  ×準管活性

        【性能指標】

        1、 空白吸光度  0.300;

        2、 線性范圍0-200U/L,r0.990;

        3、 批內/分析內精密度  CV5%;批間相對極差 7%;

        4、 準確性  相對偏差不超過±10%。

        5、 抗干擾性  50mg/dl抗壞血酸對本法測定無干擾;尿液混濁對測定有干擾,必須首先離心沉淀,去除沉淀物后,再測定。

        6、本試劑盒檢測方法與臨床檢驗操作規程推薦的CNP-NAG法進行相關性比較試驗,結果如下:Y=0.99X+0.11,r=0.995,n=30,Y為本法,XCNP-NAG法。

        【注意事項】

        1、試劑變混濁或空白吸光度值>0.300時,將不能使用,應棄去;

        2、建議各實驗室建立自己的正常值范圍;

        3、試劑與樣本量可根據需要按比例調節;

        4、請勿用嘴直接吸取試劑,避免接觸皮膚、眼睛及粘膜,一旦接觸,應即用水沖洗污染部位;

        5、使用配套的校準品校準,校準周期為30天,更換試劑批號時需要重新校準。建議使用正常值和病理值生化質控血清進行室內質控,測定的控制值應在確定的限制范圍內,若控制值失控,實驗室應采取適當的糾正措施。

        6、當標本濃度超過檢測范圍時,應用生理鹽水稀釋標本后再進行檢測,標本值為測定值乘以稀釋倍數。

        【參考范圍

        尿液:0.3-10.6U/L; 血清:8.2-25.1 U/L

        建議各實驗室建立自己的正常值參考范圍。

        【儲存條件與有效期】

        未開封的試劑在2-8℃避光條件下可穩定12個月,置37℃水浴至少可穩定7天。

        試劑開封后,存放在分析儀試劑倉中(2-8)的試劑在30天內性質穩定。

        【參考文獻】

        1Salem MA, etal. Pediatr Diabetes. 1994 Mar;3(1):37-41.

        2Van Tine BA, etal.  Cytogenet Genome Res.1998;103(1-2):202B.

         


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