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        【特別推薦】: 5'-核苷酸酶(5'-NT)測定試劑使用說明、性能指標  
        發布者:idrfz.chen   
         

         (本試劑僅用于科研、實驗、技術支持,不直接用于臨床診斷)

        【簡介】

        用于自動生化分析儀測定血清5'-核苷酸酶(5'-NT)活性。

        5'-核苷酸酶廣泛存在于肝臟和各種組織中,5'-核苷酸酶活性增高主要見于肝膽系統疾病,如肝炎、阻塞性黃膽、原發及繼發性肝癌等,且通常其活性變化與ALP的活性變化相平行。但在骨骼系統的疾病,通常ALP活性增高,5-NT活性正常。所以,對ALP活性增高的患者,測定5'- NT有助于臨床判斷ALP活性增高是肝膽系統疾病還是骨骼系統疾病所引起。

        【測定方法】

        PNP-XTO-POD偶聯連續監測法

        【測定原理】

        5-次黃嘌呤核苷酸+H2 5-NT >次黃苷+ NH4+

        次黃苷+Pi PNP >次黃嘌呤+核糖-1-磷酸

        次黃嘌呤XOD >尿酸+H2O2

        H2O2+4-AAP+酚衍生物 POD >紅色醌衍生物+H2O

        動態監測紅色醌衍生物的生成速率,可求得5'-NT活性。

        【試劑盒組成】

         

            

            

            

        試劑

        液體雙試劑,

        試劑Ⅰ:試劑Ⅱ=21

        緩沖液、4-AAP、PNP、XOD、POD、5’-IMP

        適量

        5'-NT校準品

        凍干1ml

        5'-核苷酸酶、穩定劑

        見標簽

        5'-NT質控品

        凍干1ml

        5'-核苷酸酶、穩定劑

        見標簽

        【樣本要求】

        標本以空腹血清為宜,避免溶血和脂血,血清在2-8℃可穩定7天,-20可保存30天。

        【測定步驟】

        1.本試劑為液體雙試劑,可直接使用。

        2.測定參數:波長:550nm;光徑:10mm;溫度:37。

        3.測定方法:

        加入物

        空白管

        校準管

        測定管

        試劑Ⅰ

        180

        180

        180

        蒸餾水(uL)

        5

        -

        -

        標準液(uL)

        -

        5

        -

        樣本(uL)

        -

        -

        5

        混勻,置37℃孵育5分鐘

        試劑Ⅱ(uL)

        90

        90

        90

        混勻,置37℃延滯3分鐘后讀取各管吸光度,每隔1分鐘讀1次,共讀2分鐘,計算平均每分鐘吸光度變化率ΔA/min

        4.上機參數:

          

        37

        延遲時間

        180

        樣本量

        5uL

          

        550nm

        試劑Ⅰ

        180uL

          

        800nm

        試劑Ⅱ

        90uL

        讀數時間

        120

        5.計算:

                     

        (ΔAU/min –ΔAB/min

        5'-NT活性(U/L)=                    ×準管活性

        (ΔAS/min –ΔAB/min

        【性能指標】

        1、 空白吸光度A550nm<0.050,空白吸光度變化速率ΔA/min0.0035;

        2、 測定試劑定標后K=1800左右。

        3、 線性范圍0-300 U/L (r >0.99);

        4、 批內/分析內精密度  CV5%;批間相對極差 8%;

        5、 準確性  相對偏差不超過±10%。

        6、 抗干擾性  血清膽紅素<40mg/dL、TG<1250mg/dL、血紅蛋白<500mg/dL、抗壞血酸<20mg/dL時、堿性磷酸酶<1200U/L,對測定無顯著影響。

        7、 方法對照  用本酶動力學測定試劑和某進口5’-NT連續監測法試劑盒 5'-Nucleotidase Test Kit 測定50例血清5’-NT活性,結果顯示相關系數r = 0.991。

        【注意事項】

        1、試劑和樣品可因儀器要求不同,按比例增減,計算公式不變。

        2、試劑請放2-8℃儲存,避免冷凍、污染,否則將導致失效。

        3、當標本濃度超過檢測范圍時,應用生理鹽水稀釋標本后再進行檢測,標本值為測定值乘以稀釋倍數。

        4、請勿用嘴直接吸取試劑,避免接觸皮膚、眼睛及粘膜,一旦接觸,應即用水沖洗污染部位;

        5、使用使用本公司提供的校準品校準,校準周期為60天,更換試劑批號時需要重新校準。使用正常值和病理值生化質控血清進行室內質控,測定的控制值應在確定的限制范圍內,若控制值失控,實驗室應采取適當的糾正措施。

        【參考范圍

        成人  血清0-10 U/L37℃) 

        建議各地建立本地區的參考值范圍

        【儲存條件與有效期】

        未開封的試劑在2-8℃避光條件下可穩定12個月,置37℃水浴至少可穩定7天。

        試劑開封后,存放在分析儀試劑倉中的試劑在60天內性質穩定。

        【參考文獻】

        1、, 葉應嫵, ,王毓三 全國臨床檢驗操作規程第二版 南京:東南大學出版社,1997 235-236.

        2、Joseph F..A New KineticDeterminationof Serum 5’-NucleotidaseActivity. Clincal Chemistry, , 1980,26(9, ):, 1, 2, 91, -1297.

         


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