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        【特別推薦】:a-L-巖藻糖苷酶(AFU)測定試劑使用說明、性能指標  
        發布者:idrfz.chen   
         

        (本試劑僅用于科研、實驗、技術支持,不直接用于臨床診斷)

        【簡介】

        用于自動生化分析儀測定血清a-L-巖藻糖苷酶試劑盒(AFU)活性。

        血清a-L-巖藻糖苷酶可作為肝細胞肝癌診斷的一個新標記物。測定a-L-巖藻糖苷酶活性與甲胎蛋白可使原發性肝癌的陽性檢出率從單獨測定甲胎蛋白的70%左右提高到90-94%左右,因此,檢測血清a-L-巖藻糖苷酶活性,對肝癌早期診斷和肝癌高發人群的篩查均有重要意義。

        【測定方法】

        連續監測法

        【測定原理】

        AFU催化分解CPNP-α-L-Fucoside 生成CPNP 和α-L-Fucoside,CPNP405nm有強烈的光吸收,其吸光度的變化率與a-L-巖藻糖苷酶的活性成正比。

        【試劑盒組成】

         

            

            

            

        試劑

        液體單一

        檸檬酸緩沖液、CPNP-α-L-Fucoside

        適量

        AFU質控品

        凍干1ml

        a-L-巖藻糖苷酶

        見標簽

        【樣本要求】

        樣品為空腹不溶血血清或血漿。血漿標本要用EDTA抗凝,禁止使用肝素、橘櫞酸鈉抗凝血漿。樣品應在低溫條件下保存,置2-8℃可穩定2天,置-20℃可穩定30天。

        【測定步驟】

        1.本試劑為液體單一試劑,可直接使用。

        2.測定參數:波長:405nm410nm;光徑:10mm;溫度:37℃。

        3.測定方法:

        樣本量

        Sample Volume

        μL

        25

          

        Reagent

        μL

        250

        37℃保溫60s,測定90s內吸光度變化值△A,再計算每分鐘吸光度變化速率△A/min。

          

        Main wavelength

        nm

        405410

          

        Second wavelength

        nm

        600

        反應類型

        reaction typ

         

        速率法

        反應方向

        reaction direction

         

        升反應

        K

        factor

         

        2213405nm)或2302410nm

        4.計算:

        AFU(U/L) =  (A/min×Vt)/(  消光系數×Vs) ×1000 = A/min × K

        消光系數: CPNP的毫摩爾消光系數為4.97(405nm)  4.78(410nm)。

        理論K值: 主波長為405nmK=2213;  主波長為410nmK=2302

        【性能指標】

        1、 空白吸光度A550nm<0.300,空白吸光度變化速率ΔA/min0.0035;

        2、 線性范圍0-200 U/L (r >0.99);

        3、 批內/分析內精密度  CV5%;批間相對極差 8%;

        4、 準確性  相對偏差不超過±10%。

        5、 抗干擾性  血清膽紅素<100mg/dL、TG<750mg/dL、血紅蛋白<200mg/dL、抗壞血酸<45mg/dL時,對測定無顯著影響。

        6、 方法對照  用本酶動力學測定試劑和某進口AFU連續監測法試劑盒 (а-L-Fucosidase Test Kit 測定50例血清AFU活性,結果顯示相關系數r = 0.987。

        【注意事項】

        1、試劑和樣品可因儀器要求不同,按比例增減,計算公式不變。

        2、試劑請放2-8℃儲存,避免冷凍、污染,否則將導致失效。

        3、當標本濃度超過檢測范圍時,應用生理鹽水稀釋標本后再進行檢測,標本值為測定值乘以稀釋倍數。

        4、請勿用嘴直接吸取試劑,避免接觸皮膚、眼睛及粘膜,一旦接觸,應即用水沖洗污染部位;

        5、使用正常值和病理值生化質控血清進行室內質控,測定的控制值應在確定的限制范圍內,若控制值失控,實驗室應采取適當的糾正措施。

        【參考范圍

        成人  血清12 -40U/L37℃)

        建議各地建立本地區的參考值范圍

        【儲存條件與有效期】

        未開封的試劑在2-8℃避光條件下可穩定14個月,置37℃水浴至少可穩定7天。

        試劑開封后,存放在分析儀試劑倉中的試劑在30天內性質穩定。

        【參考文獻】

        1.楊甲梅、吳孟起  中華醫學檢驗, 1990;131):2。     

        2.Takashi H,et at,Hepatology,1994; 191414。

         


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