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        【特別推薦】:髓過氧化物酶(MPO)測定試劑(雙通道)使用說明、性能指標  
        發布者:idrfz.chen   
         

        (本試劑僅用于科研、實驗、技術支持,不直接應用于臨床診斷)

        【簡介】

        用于全自動生化分析儀雙通道法測定血清或血漿樣品中髓過氧化物酶(MPO)的活性。

        MPO的結構髓過氧化物酶(MPO)是由中性粒細胞、單核細胞和某些組織的巨噬細胞分泌的含血紅素輔基的血紅素蛋白酶,在多形核中性粒細胞和單核細胞中的嗜天青顆粒中大量表達并儲存,在炎癥反應時分泌。MPO升高是心血管系統炎癥的指標之一,而且可能是動脈粥樣硬化和冠狀動脈疾病的危險指標。

        【測定方法】

        連續監測法

        【測定原理】

        MPO的檢測通過2步反應實現。

        第一步,測定樣品中總過氧化物酶活性:總過氧化物酶催化試劑中的底物分解并與4-AA 色源反應,檢測反應速率ΔA1,與標準比較后得出樣品中總過氧化物酶(TS)活性。

        第二步,測定樣品中非髓過氧化物酶活性:用特異性抑制劑抑制住樣本中髓過氧化物酶活性,剩余的非髓過氧化物酶催化試劑中的底物分解并與4-AA 色源反應,檢測反應速率ΔA2,與標準比較后得出樣品中非髓過氧化物酶(NS)活性。

        將總過氧化物酶活性(TS)減去非髓過氧化物酶(NS)活性得到樣品中髓過氧化物酶(MPO)活性。

        【試劑盒組成】

         

            

            

            

        總過氧化物酶試劑Ⅰ(TR1)

         

        GOOD’S緩沖液,4-AAP

        適量

        非髓過氧化物酶試劑Ⅰ(NR1)

         

        GOOD’S緩沖液,4-AAP,MPO抑制劑

        適量

        試劑Ⅱ(R2)

         

        底物液,色源

        適量

        MPO校準品

        凍干1ml

        髓過氧化物酶、穩定劑

        見標簽

        MPO質控品

        凍干1ml

        髓過氧化物酶、穩定劑

        見標簽

        【樣本要求】

        樣本為新鮮無溶血的血清或肝素鋰抗凝血漿,樣本中MPO活性在2-8 °C條件保存可穩定2-5天。

        【測定步驟】

        1.本試劑為液體雙試劑,可直接使用。

        2.測定參數:主/副波長:505/660nm;光徑:10mm;溫度:37℃。

        3.測定方法:

        3.1 總過氧化物酶

        加入物

        校準管1

        校準管2

        測定管

        TR1(μL)

        180

        180

        180

        校準品1(μL)

        25

        -

        -

        校準品2(μL)

        -

        25

        -

        樣本(μL)

        -

        -

        25

        混勻,置37℃孵育3~5分鐘

         R2(μL)

        60

        60

        60

        混勻,置37℃延滯1分鐘后讀取各管吸光度,每隔1分鐘讀1次,共讀2分鐘,計算平均每分鐘吸光度變化率ΔA/min

        3.2 非髓過氧化物酶

        加入物

        校準管1

        校準管2

        測定管

        NR1(μL)

        180

        180

        180

        校準品1(μL)

        25

        -

        -

        校準品2(μL)

        -

        25

        -

        樣本(μL)

        -

        -

        25

        混勻,置37℃孵育3~5分鐘

        R2(μL)

        60

        60

        60

        混勻,置37℃延滯1分鐘后讀取各管吸光度,每隔1分鐘讀1次,共讀2分鐘,計算平均每分鐘吸光度變化率ΔA/min

        4.上機參數:

          

        37

        延遲時間

        60

        樣本量

        25μL

          

        505nm

        TR1/ NR1

        180μL

          

        660nm

        R2

        60μL

        讀數時間

        120

        5.計算:

         

        總過氧化物酶(TS)活性(U/L) =(ΔAU/min –ΔAB/min)/(ΔAS/min –ΔAB/min) ×校準管總過氧化物酶(TS)活性

         

        非髓過氧化物酶(NS)活性(U/L) =(ΔAU/min –ΔAB/min)/(ΔAS/min –ΔAB/min)×校準管非髓過氧化物酶(NS)活性

         

        髓過氧化物酶(MPO)活性(U/L)= 總髓過氧化物酶(TS)活性 -非髓過氧化物酶(NS)活性

         

        【性能指標】

        1、 空白吸光度  0.100;

        2、 線性范圍0-130 U/L 0-1300 ng/mL),r0.990;

        3、 批內/分析內精密度  CV6%;批間相對極差 8%;

        4、 準確性  相對偏差不超過±10%。

        5、 抗干擾性  抗壞血酸≤0.2mmol/L、TG ≤ 1000 mg/dl、TBil ≤40 mg/dl對本法測定無干擾。

        6、本試劑盒檢測方法與某進口試劑進行相關性比較試驗,結果如下:Y=0.998X+0.22,r=0.998,n=50,Y為本法測定結果,X為進口試劑測定結果。

        【注意事項】

        1、試劑變混濁或空白吸光度值>0.100時,將不能使用,應棄去;

        2、建議各實驗室建立自己的正常值范圍;

        3、試劑與樣本量可根據需要按比例調節;

        4、請勿用嘴直接吸取試劑,避免接觸皮膚、眼睛及粘膜,一旦接觸,應即用水沖洗污染部位;

        5、使用配套的校準品校準,校準周期為30天,更換試劑批號時需要重新校準。建議使用正常值和病理值生化質控血清進行室內質控,測定的控制值應在確定的限制范圍內,若控制值失控,實驗室應采取適當的糾正措施。

        6、當標本濃度超過檢測范圍時,應用生理鹽水稀釋標本后再進行檢測,標本值為測定值乘以稀釋倍數。

        【參考范圍

        12.7U/L    127ng/mL

        建議各實驗室建立自己的正常值參考范圍。

        【儲存條件與有效期】

        未開封的試劑在2-8℃避光條件下可穩定14個月,置37℃水浴至少可穩定7天。

        試劑開封后,存放在分析儀試劑倉中(2-8)的試劑在30天內性質穩定。

        【參考文獻】

        1Nilsson L. et al. (1988) Activation of inflammatory system during cardiopulmonary bypass. Scand. J. Thorac. Cardovasc. Surg. 22: 51-53.

        2Carlsen K. H. (1997) Markers of airway inflammation in preschool wheezers. Monaldi Arch. Chest Dis. 52(5): 455-460.

         


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