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        【特別推薦】:血清總膽汁酸(TBA)測定試劑使用說明、性能指標  
        發布者:idrfz.chen   
         

        (本試劑僅用于科研、實驗、技術支持,不直接用于臨床診斷)

        【簡介】

        用于全自動生化分析儀測定人體血清總膽汁酸含量。

        膽汁酸的生成和代謝與肝臟有十分密切的關系,血清膽汁酸水平是反映肝臟實質損傷的一個重要指標。急性肝炎TBA顯著增高,可達正常水平的10~100倍。TBA水平超過20 umol/L可能為慢性肝炎。肝硬化、乙醇性肝病、中毒性肝病、膽汁淤積等,血清TBA水平都會增高。而當回腸機能有障礙時,血清中膽汁酸含量會下降。

        【測定方法】

        第五代循環酶速率法

        【測定原理】

        血清中膽汁酸根據3?-羥類固醇脫氫酶(3?-HSD)及? –硫煙酰胺腺苷二核苷酸氧化型(Thio-NAD)被氧化,生成3-酮類固醇? –硫煙酰胺腺苷二核苷酸還原型(Thio-NADH),生成的3-酮類固醇在3?-HSD? –硫煙酰胺腺苷二核苷酸還原型(NADH)的作用下,生成膽汁酸及? –硫煙酰胺腺苷二核苷酸氧化型(NAD)。通過酶的循環反應,微量的膽汁酸被擴增,通過測定生成的Thio-NADH吸光度的變化而求得血清中膽汁酸的濃度。

        【試劑盒組成】

         

            

            

            

        試劑

        液體雙試劑,

        試劑Ⅰ:試劑Ⅱ=31

        緩沖液、THIO-NAD、3α-HSD、NADH

        適量

        TBA校準品

        液體

        甘氨膽酸鈉、穩定劑

        50μmol/L

        【樣本要求】

        不溶血血清或血漿。樣本中的膽汁酸在2~8℃條件下可保存一周,-20℃條件下可保存三個月。

        【測定步驟】

        1.本試劑為液體雙試劑,可直接使用。

        2.測定參數:波長:405nm;光徑:10mm;溫度:37。

        3.測定方法:

        加入物

        空白管

        校準管

        測定管

        試劑Ⅰ

        270

        270

        270

        蒸餾水(uL)

        4

        -

        -

        標準液(uL)

        -

        4

        -

        樣本(uL)

        -

        -

        4

        混勻,置37℃孵育5分鐘

        試劑Ⅱ(uL)

        90

        90

        90

        混勻,置37℃延滯1分鐘后讀取各管吸光度,每隔1分鐘讀1次,共讀3分鐘,計算平均每分鐘吸光度變化率ΔA/min

        4.上機參數:

          

        37

        延遲時間

        60

        樣本量

        4uL

          

        405nm

        試劑Ⅰ

        270uL

          

        660nm

        試劑Ⅱ

        90uL

        讀數時間

        180

        5.計算:

        (ΔAU/min –ΔAB/min

        TBA(μmol/L)=                    ×準管濃度

        (ΔAS/min –ΔAB/min

        【性能指標】

        1、 空白吸光度A405nm<0.60,空白吸光度變化速率ΔA/min0.010;

        2、 測定試劑靈敏度  50μmol/L校準品吸光度變化速率ΔA/min0.080。

        3、 線性范圍0-180μmol/L (r >0.99);

        4、 批內/分析內精密度  CV6%;批間相對極差 8%;

        5、 準確性  相對偏差不超過±10%。

        6、 抗干擾性  500mg/dL血紅蛋白、100mg/dL抗壞血酸、50mg/dL膽紅素對測定結果無明顯干擾。

        7、 方法對照  用本酶動力學測定試劑和某進口TBA濃度試劑盒 Total Bile Acids Test Kit 測定50例血清TBA濃度,結果顯示相關系數r = 0.993。

        【注意事項】

        1、試劑和樣品可因儀器要求不同,按比例增減,計算公式不變。

        2、試劑請放2-8℃儲存,避免冷凍、污染,否則將導致失效。

        3、樣品請盡量使用新鮮血清,進餐后血清中總膽汁酸的濃度上升,請注意采血時間,不進行負荷試驗時,請遵守早晨空腹采血。

        4、請勿用嘴直接吸取試劑,避免接觸皮膚、眼睛及粘膜,一旦接觸,應即用水沖洗污染部位;

        5、使用使用本公司提供的校準品校準,校準周期為30天,更換試劑批號時需要重新校準。使用正常值和病理值生化質控血清進行室內質控,測定的控制值應在確定的限制范圍內,若控制值失控,實驗室應采取適當的糾正措施。

        6、各種抗凝劑一般用量對測試無影響。

        【參考范圍

        0-10μmol/L

        建議各地建立本地區的參考值范圍。

        【儲存條件與有效期】

        未開封的試劑在2-8℃避光條件下可穩定12個月,置37℃水浴至少可穩定7天。

        試劑開封后,存放在分析儀試劑倉中的試劑在30天內性質穩定。

        【參考文獻】

        1. Lorentz K. Approved recommendation on EFCC methodsfor the measurement of catalytic concentration of enzymes.Part 9. IFCC method for ?-amylase (1,4-?-D-Glucan-4-glucanohydrolase, EC 3.2.1.1). Clin Chem Lab Med 1998;38:185-203.

         


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