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        創燁生物:天門冬氨酸氨基轉移酶測定試劑使用說明、性能指標  
        發布者:idrfz.chen   
         

         (本試劑僅用于科研、實驗、技術支持,不直接用于臨床診斷)

        【簡介】

        用于自動生化分析儀測定人體血清或血漿AST活性。

        臨床意義:AST活力升高與心肌梗死有關,疼痛4-6小時后明顯升高,24-30小時后達到高峰。高水平酶活力也見于肝細胞損傷,肌營養不良以及皮肌炎。

        【測定方法】

         IFCC推薦速率法

        【測定原理】

        L-門冬氨酸+α-酮戊二酸AST >草酰乙酸+L-谷氨酸

        草酰乙酸 + NADH + H+     MDH >  L-蘋果酸+NAD++H2O

        NADH的減少,引起在波長340nm處吸光度的下降,下降速率與AST活力成正比。

        【試劑盒組成】

         

            

            

            

        試劑

        液體雙試劑,

        試劑Ⅰ:試劑Ⅱ=21

        Tris緩沖液、NADH、MDH、

        L-門冬氨酸、α-酮戊二酸

        適量

        【樣本要求】

        不溶血血清或肝素抗凝血漿。樣本中天冬氨酸氨基轉移酶在冷藏(2-8℃)條件可穩定7天。

        【測定步驟】

        1.本試劑為液體雙試劑,可直接使用。

        2.測定參數:波長:340nm;光徑:10mm;溫度:37℃。

        3.測定方法:

        加入物

        空白管

        測定管

        試劑Ⅰ

        150

        150

        蒸餾水(uL)

        9

        -

        標準液(uL)

        -

        -

        樣本(uL)

        -

        9

        混勻,置37℃孵育1-5分鐘

        試劑Ⅱ(uL)

        75

        75

        混勻,置37℃延滯1分鐘后讀取各管吸光度,每隔1分鐘讀1次,共讀3分鐘,計算平均每分鐘吸光度變化率ΔA/min

        4.上機參數:

          

        37

        延遲時間

        60

        樣本量

        9uL

          

        340nm

        試劑Ⅰ

        150uL

          

        450nm

        試劑Ⅱ

        75uL

        讀數時間

        180

         

        5.計算:

                     

        (ΔAU/min –ΔAB/min×TV×103

        AST活性(U/L)=                            = (ΔAU/min –ΔAB/min×K

        ε×SV×L

        式中: TV 總反應物體積(μl);

                    SV 樣本體積(μl);

                   ε NADH在340nm處的毫摩爾吸光系數為6.22;

                    L  比色杯光徑(cm)。

                    K=-4180 (1.0cm光徑)

        【性能指標】

        1、 空白吸光度A1.000;

        2、 線性范圍0 -800U/L。

        3、 批內/分析內精密度  CV5%;批間相對極差 7%;

        4、 準確性  相對偏差不超過±10%。

        5、 抗干擾性  血清膽紅素<258umol/L、TG<12mmol/L、維生素<100mg/L、丙酮酸<700μmol/L,對測定結果無顯著影響,中等度溶血標本(Hb1000mg/L),測定結果無顯著影響;明顯溶血(Hb 2800mg/L)標本,測定結果偏低。

        6、 方法對照  本試劑盒檢測方法與賴氏法進行相關性比較試驗,結果如下:Y=1.0100X-1.8,r=0.9980,n=30,Y為本法試劑,X為賴氏法試劑。

        【注意事項】

        1、試劑和樣品可因儀器要求不同,按比例增減,計算公式不變。

        2、試劑請放2-8儲存,避免冷凍、污染,否則將導致失效。

        3、高脂或黃疸樣本在340nm處有較高的吸收值。在這些樣本的測定中,高活性的門冬氨酸氨基轉移酶雖然可能將底物耗盡,但在340nm處仍有較高吸收值,此時樣本應稀釋后再測試。

        4、請勿用嘴直接吸取試劑,避免接觸皮膚、眼睛及粘膜,一旦接觸,應即用水沖洗污染部位;

        5、建議使用Roche多項校準血清校準K值,校準周期為30天,更換試劑批號時需要重新校準。使用正常值和病理值生化質控血清進行室內質控,測定的控制值應在確定的限制范圍內,若控制值失控,實驗室應采取適當的糾正措施。

        6、可以采用單一試劑模式進行檢測,臨用時將試劑與試劑2:1比例混合。若混合后試劑空白小于1.000(以水為空白,340nm波長、1cm光徑)時,表明試劑已失效。

        【參考范圍

        5 -40U/L37℃) 

        建議各地建立本地區的參考值范圍。

        【儲存條件與有效期】

        未開封的試劑在2-8℃避光條件下可穩定12個月,置37℃水浴至少可穩定7天。

        試劑開封后,存放在分析儀試劑倉中的試劑在30天內性質穩定。

        【參考文獻】

        1. Clin. Chem. Acta 105 (1980) S. 147 - 172.

        2. Synopsis der Leberkrankheiten: H. Wallh?fer, E. Schmidt u. F. W. Schmidt, G. Thieme Verlag, Stuttgart 1974.

        3. Thefeld W. et al, Dt. Med. Wschr. 99 (1974), 343.


         


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