（本試劑僅用于科研、實驗、技術支持，不直接用于臨床診斷） 【簡介】 用于自動生化分析儀測定血清丙氨酸氨基轉移酶（ALT）活性。 人體多種臟器都含有ALT，主要分布在肝、腎、心、肌肉，肝內ALT活性遠遠超過其它臟器的活性，主要存在肝細胞質的可溶性部分，故測定ALT活性可反映肝臟損害具有特殊的意義。 【測定方法】 IFCC推薦速率法 【測定原理】L—丙氨酸+α—酮戊二酸 丙酮酸+谷氨酸丙酮酸+NADH+H L—乳酸+NAD++H2O NADH的減少，引起在波長340nm處的吸光度下降，下降速率與ALT活性成正比 。 【試劑盒組成】 | 規 格 | 組 份 | 濃 度 | 試劑 | 液體雙試劑， 試劑Ⅰ：試劑Ⅱ=2:1 | Tris緩沖液、NADH、LDH、 L-丙氨酸、α-酮戊二酸 | 適量 |
【樣本要求】 不溶血血清或肝素抗凝血漿。樣品中丙氨酸氨基轉移酶在2-8℃可穩定7天。 【測定步驟】 1.本試劑為液體雙試劑，可直接使用。 2.測定參數：波長：340nm；光徑：10mm；溫度：37℃。 3.測定方法： 加入物 | 空白管 | 測定管 | 試劑Ⅰ | 150 | 150 | 蒸餾水(uL) | 9 | - | 標準液(uL) | - | - | 樣本(uL) | - | 9 | 混勻，置37℃孵育1-5分鐘 | 試劑Ⅱ(uL) | 75 | 75 | 混勻，置37℃延滯1分鐘后讀取各管吸光度，每隔1分鐘讀1次，共讀3分鐘，計算平均每分鐘吸光度變化率ΔA/min |
4.上機參數： 溫 度 | 37℃ | 延遲時間 | 60秒 | 樣本量 | 9uL | 主 波 長 | 340nm | 試劑Ⅰ | 150uL | 副 波 長 | 450nm | 試劑Ⅱ | 75uL | 讀數時間 | 180秒 |
5.計算： （ΔAU/min –ΔAB/min）×TV×103 ALT活性（U/L）= = （ΔAU/min –ΔAB/min）×K ε×SV×L 式中： TV 總反應物體積（μl）； SV 樣本體積（μl）； ε NADH在340nm處的毫摩爾吸光系數為6.22； L 比色杯光徑（cm）。 K=-4180 (1.0cm光徑) 【性能指標】 1、 空白吸光度A≧1.000； 2、 線性范圍0 -800U/L。 3、 批內/分析內精密度 CV≤5％；批間相對極差 ≤7％； 4、 準確性 相對偏差不超過±10％。 5、 抗干擾性 血清膽紅素<258umol/L、TG<12mmol/L、維生素<100mg/L、丙酮酸<500μmol/L，對測定結果無顯著影響，中等度溶血標本（Hb約1000mg/L），測定結果無顯著影響；明顯溶血（Hb 2800mg/L）標本，測定結果偏低。 6、 方法對照 本試劑盒檢測方法與賴氏法進行相關性比較試驗，結果如下：Y=0.9895X-2.2，r=0.9986，n=30，Y為本法試劑，X為賴氏法試劑。 【注意事項】 1、試劑和樣品可因儀器要求不同，按比例增減，計算公式不變。 2、試劑請放2-8℃儲存，避免冷凍、污染，否則將導致失效。 3、高脂或黃疸樣本在340nm處有較高的吸收值。在這些樣本的測定中，高活性的丙氨酸氨基轉移酶雖然可能將底物耗盡，但在340nm處仍有較高吸收值，此時樣本應稀釋后再測試。 4、請勿用嘴直接吸取試劑，避免接觸皮膚、眼睛及粘膜，一旦接觸，應即用水沖洗污染部位； 5、建議使用Roche多項校準血清校準K值，校準周期為30天，更換試劑批號時需要重新校準。使用正常值和病理值生化質控血清進行室內質控，測定的控制值應在確定的限制范圍內，若控制值失控，實驗室應采取適當的糾正措施。 6、可以采用單一試劑模式進行檢測，臨用時將試劑Ⅰ與試劑Ⅱ按2:1比例混合。若混合后試劑空白小于1.000（以水為空白，340nm波長、1cm光徑）時，表明試劑已失效。 【參考范圍】 8 -40U/L（37℃） 建議各地建立本地區的參考值范圍。 【儲存條件與有效期】 未開封的試劑在2-8℃避光條件下可穩定12個月，置37℃水浴至少可穩定7天。 試劑開封后，存放在分析儀試劑倉中的試劑在30天內性質穩定。 【參考文獻】 1. Clin. Chem. Acta 105 (1980) S. 147 - 172. 2. Synopsis der Leberkrankheiten: H. Wallh?fer, E. Schmid u. F. W. Schmidt, G. Thieme Verlag, Stuttgart 1974. 3. Thefeld W. et al, Dt. Med. Wschr. 99 (1974), 343.
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